RagB过表达慢病毒载体的构建及应用

• 作者: 周志姣 欧翔 皮银珍
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 慢病毒载体 C2C12细胞 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 方法学研究
• 页码范围: 715-719
• 分类号: Q7
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含有RagB的重组慢病毒表达载体,实现RagB基因在C2C12细胞中过表达,并检测熊果酸对该细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性的调节作用.方法 使用Flag pLJM1 RagBWr、Flag pLJM1RagB54L和Flag pLJM1 RagB99L慢病毒载体作为模板,PCR扩增Flag-RagBWT、Flag-RagB54L和Flag-RagB99L,然后将其亚克隆到pWPI载体的SwaI酶切位点之中,进行茵液PCR鉴定;将克隆好的pWPI-RagBWr、pWPI-RagB54L和pWPI-RagB99L质粒和病毒包装质粒psPAX2、pMD2.G按相应的比例转染到293T细胞中,48 h后收集上清液感染C2C12细胞,实现RagB基因在C2C12细胞中过表达;使用亮氨酸和熊果酸单独或共同处理RagB99L过表达的C2C12细胞,Western blot检测mTOR活性.结果 使用上清液感染C2C12细胞,荧光显微镜显示感染效率接近100％,Western blot证实RagB蛋白表达明显增高;熊果酸显著抑制RagB99L过表达细胞中mTOR活性.结论 通过构建慢病毒载体实现RagB基因在C2C12细胞中过表达,RagB在熊果酸抑制mTOR活性中具有关键作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	皮银珍	长沙市第一医院内分泌科	31	83	5.0	7.0
2	周志姣	中南大学湘雅三医院病理科	3	2	1.0	1.0
3	欧翔	长沙市第一医院内分泌科	1	1	1.0	1.0