一种高效抑制Jurkat细胞表达RhoGDI2的方法

• 作者: 卫丹 落继先
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: Jurkat细胞 RhoGDI2 短发夹RNA 慢病毒 白血病
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 516-519
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.04.012

摘要

目的:RhoGDI2是RhoGTP酶的解离抑制因子,在白血病细胞内表达量很高.构建RhoGDI2短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体,并鉴定该慢病毒在急性T细胞白血病细胞系Jurkat内的抑制效率.方法:针对人rhoGDI2基因序列合成shRNA序列,通过限制性内切酶BamH Ⅰ和Xho Ⅰ、T4DNA连接酶,将该shRNA序列插入慢病毒载体pEN_hH1c,测序正确后通过LR重组酶与pDSL_hpUGIP重组,转化感受态细菌,筛选阳性克隆,测序鉴定正确后用脂质体法将质粒与psPAX2、pMD2共转染293T细胞、包装病毒并侵染Jurkat细胞,采用荧光显微镜观察侵染效率,Western印迹鉴定RhoGDI2 shRNA在Jurkat细胞内的表达.结果:构建的RhoGDI2 shRNA慢病毒成功侵染Jurkat细胞并抑制RhoGDI2的表达.结论:构建并鉴定了RhoGDI2 shRNA的慢病毒表达质粒,为研究RhoGDI2在白血病中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	落继先	山西大学生命科学学院	5	6	1.0	2.0
2	卫丹	山西大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0