苹果sMdCAX1基因超表达载体的构建及遗传转化

• 作者: 刘帅 张璐 王三红 蔡斌华 魏萌涵
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 苹果 sMdCAX1基因 植物超表达载体 遗传转化
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 1460-1469
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2016.08.1460

摘要

为使sMdCAX1基因能在苹果中高效表达,改善苹果对Ca2+吸收转运的能力,本研究构建了sMdCAX1植物超表达载体并将其通过农杆菌介导法转入长富6号苹果中.根据MdCAX1基因序列设计引物,从长富6号中克隆MdCAX1基因,通过PCR方法截除编码MdCAX1基因的N末端序列,获得sMdCAX1片段.利用重叠PCR方法将sMdCAX1序列中的Sac I位点进行定点突变,并在序列两端分别添加BamHI和SacI酶切位点,获得长度为1 272 bp的突变序列sMd1+ 2Mu.利用BamHI和Sac I双酶切sMd1+ 2Mu和植物表达载体pYH4215,目的片段经回收、连接、转化和筛选,获得植物双元表达载体pYH4215-sMd1,并将该载体转化农杆菌菌株EHA105.以长富6号无菌试管苗叶片为受体,进行遗传转化获得了转基因植株,经鉴定,有6个株系呈GUS染色阳性,其中2个株系呈PCR阳性.进一步对PCR鉴定阳性的株系进行RT-PCR分析,表明sMdCAX1基因在这2个株系中得到表达.本试验结果为进一步研究苹果MdCAX1基因的功能和通过转基因方法提高苹果果实钙含量奠定了基础.