流感病毒血凝素茎干部通用疫苗的构建及免疫原性研究

• 作者: 刘焕 单虎 李桂梅 马礼照 黄娟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 流感病毒 血凝素蛋白 茎干部 通用型疫苗
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1764-1770
• 分类号: S85
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.11.014

摘要

为了构建基于血凝素(hemagglutinin,HA)茎干部的流感通用疫苗并研究其免疫原性,本研究以A/Puerto Rico/8/1934(H 1Nl)流感病毒为模板,扩增HA茎干部区域主要蛋白HA2(HA的344～566 aa)和完整茎干部HA-stem(缺失53 aa～276 aa的HA),与真核表达载体pCAGGS连接获得重组质粒.将重组质粒瞬时转染至HEK-293T细胞,利用RT-PCR及间接免疫荧光实验检测其表达情况.将6～8周龄健康雌性BALB/c小鼠(Mus musculus)分为4组,即2个重组质粒组及pCAGGS质粒对照组和磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)对照组,分别于0和30 d免疫2次,在免疫当天(第0天)及免疫后第60天采集小鼠眼眶血,测定其HI抗体、细胞中和抗体和IFN-γ水平.结果表明,成功构建了重组质粒pCAGGS-HA2和pCAGGS-HA-stem,且重组质粒转染HEK-293T细胞后均能检测到目的蛋白及其mRNA.免疫后第60天pCAGGS-HA2和pCAGGS-HA-stem免疫组对A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)病毒的HI抗体效价均为5 log2,中和抗体效价分别为1∶27和1∶24.对异源病毒A/Chicken/Hebei/4/2008(H9N2)病毒的HI抗体效价分别为3 log2和6 log2,中和抗体效价分别为1∶24和1∶22.pCAGGS-HA2和pCAGGS-HA-stem组1NF-γ含量分别为(2362.40+98.24) ng/L和(2497.06+ 120.44) ng/L.pCAGGS-HA2及pCAGGS-HA-stem诱导产生的抗体及INF-γ水平与免疫前及对照组相比差异显著(P＜0.05).结果表明,pCAGGS-HA2和pCAGGS-HA-stem能够诱导对异源病毒的交叉反应,有望作为候选的流感通用疫苗.