赤眼鳟Toll样受体3基因cDNA全长克隆及表达分析

• 作者: 刘巧林 彭慧珍 李伟 王荣华 肖调义 苏建明
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 赤眼鳟 Toll样受体3 分子克隆 表达特征
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 页码范围: 894-901
• 页数: 8页
• 分类号: Q781
• 字数: 5581字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2016.115

摘要

为探究赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus) Toll样受体3(Toll-like receptor 3,ScTLR3)基因是否参与抗病毒免疫反应,实验运用RACE技术,克隆得到Sc TLR3基因cDNA全长序列,并进行了生物信息学分析;通过RealTime qPCR技术,检测了ScTLR3 mRNA在健康赤眼鳟10个组织中的分布以及感染草鱼呼肠孤病毒(GCRV)后肝脏、脾脏、体肾和头肾中的表达特征.结果表明:ScTLR3基因cDNA序列全长4043 bp,包括5'-非编码区(UTR) 216 bp,开放阅读框(ORF)2715 bp和3'-UTR 1112 bp;ScTLR3共编码904个氨基酸残基,推导的蛋白分子量102.67 kD,理论等电点8.76;SMART结构域预测显示,ScTLR3由N端的信号肽(SP)、富亮氨酸结构域(LRRs)、跨膜结构域(TM)和C端的Toll/白介素-1受体结构域(TIR)组成.实时荧光定量结果显示,ScTLR3mRNA在检测的各组织中均有表达,肝脏中的相对表达量极显著高于其他组织(P＜0.01);感染GCRV后,肝脏、脾脏、体肾和头肾组织中ScTLR3 mRNA均上调表达,肝脏、脾脏和体肾组织中的相对表达量在24h达到峰值,分别为对照组的5倍、7倍和6倍.研究表明,ScTLR3具有TLRs家族基因的典型结构特征,并能被GCRV诱导表达,推测其在赤眼鳟抗GCRV入侵免疫反应中发挥了重要作用.