黄芪多糖调控多胺介导的Ca2+-RhoA通路促进小肠上皮细胞迁移研究

• 作者: 余黄合 宋厚盼 李如意 李茹柳 李鑫 秦裕辉 蔡雄 袁振仪 魏艳霞
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 黄芪多糖 小肠上皮细胞 细胞迁移 细胞质游离钙离子 RhoA 多胺
• 年，卷（期）: 2016,（23）
• 所属期刊栏目: 药理与临床
• 页码范围: 4224-4230
• 分类号: R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.23.018

摘要

目的 考察黄芪多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及迁移过程细胞内多胺水平、细胞质游离钙离子([Ca2+]cyto)的量、细胞骨架蛋白RhoA表达的影响,探讨黄芪修复胃肠黏膜损伤的疗效机制.方法 黄芪药材经水提醇沉、Sevage法去蛋白后得到黄芪粗多糖,运用DEAE纤维素柱分离得到黄芪多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,黄芪多糖I以Sephadex LH-20凝胶柱色谱得到黄芪多糖Ⅴ.Tips划痕法建立IEC-6细胞损伤迁移模型,柱前衍生高效液相色谱法测定多胺的量,流式细胞仪检测[Ca2+]cyto水平,Westem blotting法检测RhoA蛋白表达.考察黄芪多糖对正常IEC-6细胞[未加α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)]和多胺耗竭IEC-6细胞(加入DFMO)迁移、多胺水平、[Ca2+]cyto的量及RhoA蛋白表达的影响.结果 黄芪粗多糖、黄芪多糖Ⅰ、黄芪多糖Ⅴ(50、100、200 mg/L)均能促进IEC-6细胞迁移(P＜0.01),并且可逆转多胺合成抑制剂DFMO所致的细胞迁移抑制效果(P＜0.01);在正常(未加DFMO)或多胺耗竭情况(加DFMO),黄芪多糖V均可提高迁移过程细胞内多胺的量(P＜0.01);黄芪多糖V可提高细胞迁移过程[Ca2+]cyto水平(P＜0.01),并且可逆转DFMO所致的[Ca2+]cyto水平下降(P＜0.01);黄芪多糖V(100、200 mg/L)可明显提高RhoA蛋白表达,同时可逆转DFMO所导致的RhoA蛋白表达抑制作用.结论 黄芪多糖可加速胃肠黏膜损伤早期修复过程,其机制可能与增加黏膜上皮细胞多胺的量,提升[Ca2+]cyto,从而提高RhoA蛋白表达,进而促进胃肠黏膜上皮细胞迁移有关.