橘小实蝇nAChR α9亚基基因的鉴定及其时空表达

• 作者: 杨文佳 王进军 袁国瑞 许抗抗
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 橘小实蝇 烟碱型乙酰胆碱受体 基因克隆 序列分析 表达谱 实时定量PCR
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1189-1198
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2016.11.006

摘要

[目的]橘小实蝇Bactrocera dorsalis是世界性分布的危害果蔬的重要检疫性农业害虫,目前已对包括新烟碱类在内的多种杀虫剂产生了抗性.本研究在克隆鉴定橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α9亚基基因cDNA的基础上,对其分子特性和系统发育进行生物信息学分析,并检测了该基因在橘小实蝇不同发育阶段及成虫不同组织中的表达模式,为进一步研究其潜在功能及在抗药性中的作用奠定基础.[方法]通过高通量测序技术对橘小实蝇进行转录组测序,对高质量序列拼接组装、基因鉴定及同源性比对分析,预测橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体候选基因.采用RT-PCR和RACE(rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆该基因的cDNA全长序列,利用生物信息学分析软件分析其基本生物信息;以α-tubulin为内参基因,利用qPCR研究该基因mRNA在橘小实蝇不同发育阶段及成虫头、胸、腹等组织中的表达模式.[结果]根据预测的基因序列,设计特异性引物进行RACE扩增,从橘小实蝇中克隆获得一条烟碱型乙酰胆碱受体基因的全长序列,cDNA全长1 486 bp,完整开放阅读框1 281 bp,编码426个氨基酸,推测其蛋白质分子量为49.1 kD,理论等电点6.56.该基因经序列比对命名为Bdα9,GenBank登录号为JQ178254.氨基酸同源性及系统进化树分析显示,该基因的编码蛋白具有nAChRα亚基的典型特征,并与Agα9和Dmβ3聚类在一起,与其他昆虫nAChRα9亚基具有22％ ～ 27％的氨基酸序列一致性.qPCR结果表明,Bdα9mRNA在橘小实蝇整个发育阶段均有表达,成虫期的表达量显著高于卵、2龄幼虫、3龄幼虫和蛹期;Bdα9在橘小实蝇成虫头部中表达量最高,且显著高于胸部和腹部中的表达量.[结论]鉴定了橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体基因Bdα9,明确了该基因在橘小实蝇不同发育阶段及成虫不同组织中的表达模式.根据qPCR的结果,推测Bdα9可能在橘小实蝇成虫期具有重要功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王进军	西南大学植物保护学院昆虫学及害虫控制工程重庆市市级重点实验室	131	1530	22.0	30.0
2	袁国瑞	西南大学植物保护学院昆虫学及害虫控制工程重庆市市级重点实验室	2	5	1.0	2.0
3	杨文佳	西南大学植物保护学院昆虫学及害虫控制工程重庆市市级重点实验室	7	13	2.0	3.0
7	许抗抗	西南大学植物保护学院昆虫学及害虫控制工程重庆市市级重点实验室	2	7	2.0	2.0