HEK293细胞中杂合状态下无义突变体L539fs/47对野生型HERG电流的作用

• 作者: 刘仲伟 吕颖 孙超峰 张军波 张爱峰 李国良 潘军强 王军奎 韩稳琦
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: HERG 无义突变 不完全负显性抑制作用 HEK293 细胞
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 353-357,371
• 页数: 6页
• 分类号: R541.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201603011

摘要

目的：研究单独表达无功能的无义突变体 L539fs/47在 HEK293细胞中杂合状态下对野生型 HERG电流的作用。方法用脂质体转染法将野生型 HERG 及突变体 HERG-L539fs/47分别转染 HEK293细胞36 h 后,RT-PCR检测 HERG mRNA表达,免疫荧光及免疫印迹检测 HERG蛋白定位及表达量,全细胞膜片钳检测 IHERG电流密度。结果野生组 HERG的mRNA表达量高于L539fs/47突变组(1.066±0.612 vs.0.254±0.397,P<0.01)。免疫荧光检测发现野生型 HERG蛋白多于突变体,野生型 HERG 蛋白主要分布在细胞膜上；而 HERG 突变体蛋白大部分滞留胞质。免疫印迹显示：不同于野生型 HERG135 ku及155 ku 2个条带,突变体仅60 ku 1个条带。全细胞膜片钳检测 WT+MT组IHERG较WT组下降55.23%(22.03±2.62 vs.49.20±2.31 pApF,P<0.01)。结论 HEK293细胞中杂合状态下截断突变体 L539fs/47对野生型 HERG电流的不完全负显性抑制作用。