沉默DKK1、Sost重组腺病毒载体的构建及其对MG63细胞增殖、ALP活性和钙离子浓度影响研究

• 作者: 万雷 张志海 柴生颋 王凡 王吉利 魏合伟 黄宏兴 黄红
• 来源期刊: 中国骨质疏松杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DKK1 Sost 沉默基因 重组腺病毒 MG63细胞
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1361-1369
• 页数: 9页
• 分类号: R392.11
• 字数: 5445字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7108.2016.11.001

摘要

目的 构建Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因沉默重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙离子浓度影响作用.方法 设计出特异性针对DKK1、Sost和无关对照序列(Scr),构建DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,用qPCR法和蛋白印记(Western blot)法选出沉默效率最好的扩增DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,并用荧光显微镜观察计算病毒滴度.MG63细胞被分成空白对照组、沉默DKK1(Ad-shDKK1)组、沉默Sost(Ad-shSost)组、沉默DKK1+ Sost(Ad-shDKK1+ Ad-shSost)组4组,分别用优选出的沉默效率最好的shDKK1和shSost腺病毒载体转染MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)检测观察细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度.结果 ①DKK1 pAd-shDKKl-1和Sost pAd-GFP-shRNA-2沉默效率最高;②与空白对照组对比,沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默DKK1+ Sost组的细胞光吸收值(0D)、ALP活性测定值均升高,而钙离子浓度均降低,以沉默DKK1+ Sost组变化最明显,组间比较具有统计学差异(P＜0.01和P＜0.05).结论 DKK1、Sost沉默可促进MG63细胞增殖、提高ALP活性,降低钙离子浓度,尤以二者同时沉默时的作用最强.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄宏兴	广州中医药大学附属骨伤科医院骨科	101	788	16.0	22.0
2	张志海	广州中医药大学附属骨伤科医院骨科	48	268	10.0	14.0
3	魏合伟	广州中医药大学附属骨伤科医院骨科	73	792	16.0	25.0
4	柴生颋	广州中医药大学附属骨伤科医院骨科	30	317	10.0	17.0
5	黄红		43	333	10.0	16.0
6	万雷	广州中医药大学附属骨伤科医院骨科	63	287	10.0	14.0
7	王凡		7	60	5.0	7.0