人SR-BI基因表达抑制慢病毒载体构建及其稳定细胞株的筛选

• 作者: 任浩 高伟 高荣
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 人SR-BI 短发夹状RNA 肝癌细胞系 构建 筛选
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 203-207
• 分类号: R378.21
• 语种: 中文
• DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2016.03.02

摘要

目的 建立SR-BI表达抑制的肝癌细胞系,以作为研究SR-BI基因突变对HCV感染性影响的细胞模型.方法 构建SR-BI短发夹状RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒重组质粒Lv-SR-BI-shRNA,挑取克隆进行PCR扩增和序列测定;将阳性重组质粒与慢病毒辅助质粒共转染HEK2973T细胞,包装SR-BI shRNA慢病毒并进行病毒滴度测定.SR-BI shRNA慢病毒感染人肝癌细胞株Huh7和Huh7.5.1细胞,嘌呤霉素筛选,Real-time PCR和Western blot法检测SR-BI mRNA转录和蛋白表达.结果 测序结果证实Lv-SR-BI-shRNA慢病毒载体构建成功并获得HEK293T细胞中包装的慢病毒,Lv-SR-BI-shRNA重组慢病毒感染Huh7和Huh7.5.1细胞,感染组SR-BI mRNA转录降低,蛋白表达降低.结论 建立了SR-BI表达抑制的人肝癌细胞株Huh7-siSR-BI和Huh7.5.1-siSR-BI稳定细胞系.