荧光定量RT-PCR检测PRRSV方法的建立及初步应用

• 作者: 劳秀杰 叶笑 周一媚 徐露凝 杨永春 王晓杜 邵春艳 郑悦 黄巧莲
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 荧光定量RT-PCR (qRT-PCR) ORF5
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 34-39
• 页数: 6页
• 分类号: S852.6
• 字数: 4971字
• 语种: 中文

摘要

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5保守区域为靶基因,基于SYBR Green构建了以RNA为模板、反转录和PCR扩增一步完成的荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)方法.该方法对质粒和细胞培养物中病毒的检测限分别为1×100 copies/μL和1×10-2 TCID50/mL;组内和组间差异系数(CV)均小于5％.利用本方法检测126份临床组织样品,PRRSV阳性率为42.06％,与传统RT-PCR检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.918),且敏感性显著高于传统RT-PCR.本研究建立的qRT-PCR方法为猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断提供了技术手段.