黄色短杆菌 ilvN 基因定点突变和 ilvBN、ilvC 串联表达对L-缬氨酸产量的影响

• 作者: 吴松刚 施巧琴 曾邦定 梁玲 王明兹 郭小雷 黄钦耿
• 来源期刊: 化工学报
• 关键词: L-缬氨酸 定点突变 乙酰羟酸合成酶 乙酰羟酸异构还原酶 共表达
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 表面与界面工程
• 页码范围: 2956-2962
• 页数: 7页
• 分类号: Q815
• 语种: 中文
• DOI: 10.11949/j.issn.0438-1157.20151935

摘要

由 ilvBN、ilvC 基因编码的乙酰羟酸合成酶（AHAS）和乙酰羟酸异构还原酶（AHAIR）是 L-缬氨酸合成途径的两个关键酶。本实验以黄色短杆菌 Brevibacterium flavum MD515为出发菌株，通过 PCR 技术扩增其 ilvBN和 ilvC 基因，对调节亚基 ilvN 进行定点突变，获得抗反馈抑制突变型编码基因 ilvBNrC；然后将其插入穿梭表达载体 pZ8-1中，构建串联表达质粒 pZ8-1-ilvBNrC 并转化出发菌株，筛选获得工程菌株 B.flavum MD515/pZ8-1-ilvBNrC。摇瓶发酵该工程菌株 L-缬氨酸产量达29.5 g·L?1，较出发菌株提高27.7%，同时生长速度和生物量也比出发菌株有所提高，丙氨酸含量降低，L-亮氨酸及 L-异亮氨酸含量提高。在30 L 发酵罐连续补料发酵60 h 后 L-缬氨酸产量达61.7 g·L?1，糖酸转化率为39.2%。菌株 MD515/pZ8-1-ilvBNrC 发酵液透光率较出发菌株高且蛋白含量低，这些特性有利于发酵液后期的分离提取。