Optiprep连续密度梯度离心方法的建立

• 作者: 宫悦 寸韡 张辉 李亚东 李智华 毕研伟
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: Optiprep密度梯度离心 碘克沙醇 旋转角度 纯化
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 834-837
• 页数: 4页
• 分类号: Q503
• 字数: 2469字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.06.020

摘要

目的:试验不同条件,优化Optiprep密度梯度离心方法,建立最佳的Optiprep连续密度梯度,为纯化病毒提供良好的参数.方法:试验不同的旋转角度、重复次数、离心时间,以及用不同浓度的Optiprep制备连续密度梯度等条件,摸索制备连续密度梯度的最佳方案,将此最佳方案应用于纯化丙肝病毒(HCV),并通过qRT-PCR验证纯化效果.结果:通过各种条件的摸索,确立了制备连续密度梯度的最佳方案,即制备10％～40％ Optiprep连续密度梯度,在旋转角度为85°时,1号程序设置为30 r/min离心5 s,2号程序设置为0 r/min 15 s,重复1～2程序10次.将此程序用于纯化HCV,得到了较好的纯化效果.结论:建立了制备Optiprep连续密度梯度离心的方法,为进一步提高病毒的纯化效果提供了参数.