13C辅助的超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用方法精确分析毕赤酵母胞内代谢物浓度

• 作者: 储炬 刘晓云 庄英萍 张嗣良 李敏超 郭孟磊 黄明志
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 超高效液相色谱-三重四极杆质谱 13C同位素标记 代谢物浓度 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 232-240
• 页数: 9页
• 字数: 4894字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.150635

摘要

毕赤酵母作为一种高效的外源蛋白表达平台,其蛋白表达水平与胞内代谢物浓度紧密相关.但胞内代谢物种类多、物化性质差异大、浓度低、周转快,对其绝对浓度的精确检测一直难于实现.本研究将超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用分析方法与13C同位素标记技术相结合,探索解决该难题的方法.首先,优化了超高效液相色谱的操作条件,利用3种色谱柱实现了64种常见中间代谢物的分离;对三重四极杆质谱仪的检测离子对和碰撞电压等操作条件进行优化,找到了对各种物质具有专一性的检测离子对.然后,利用全标记13C标记底物培养细胞,收集胞内的全标记代谢物用作定量内标物,建立了53种中间代谢物的标准曲线.实验结果表明,本方法不但精确性高,标准曲线相关系数达到0.99以上,而且重现性好,受实验条件和仪器操作条件的影响很小.将本方法应用于毕赤酵母胞内代谢物浓度的绝对定量分析,成功获得了胞内各种代谢物的浓度水平,为后续深入研究毕赤酵母代谢调控机理,实现外源蛋白的高效生产奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	储炬	华东理工大学国家生化工程技术研究中心	227	1871	22.0	29.0
2	庄英萍	华东理工大学国家生化工程技术研究中心	180	1652	23.0	30.0
3	黄明志	华东理工大学国家生化工程技术研究中心	21	128	6.0	11.0
4	李敏超	华东理工大学国家生化工程技术研究中心	4	9	2.0	3.0
5	刘晓云	华东理工大学国家生化工程技术研究中心	2	3	1.0	1.0
6	郭孟磊	华东理工大学国家生化工程技术研究中心	1	3	1.0	1.0