靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建与鉴定

• 作者: 何玉婷 余祖江 孙冉冉 李娟 申珅 阚全程 陈晓龙
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: HIF-1α CRISPR/Cas9 肝细胞癌 载体构建 基因敲除
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 293-297
• 页数: 5页
• 分类号: Q781
• 字数: 3277字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2016.03.002

摘要

目的:构建靶向低氧诱导因子(HIF)-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒,并体外鉴定其敲除效果.方法:设计靶向HIF-1α基因的gRNA序列,将其插入到CRISPR/Cas9质粒骨架载体pCAG-T7中,转化后挑取克隆,进行测序验证.将构建好的重组质粒体外转染人肝癌细胞HepG2和SK-Hep-I,利用嘌呤霉素进行筛选并扩大培养获得HIF-1α基因敲除混合克隆细胞,应用Western blot技术检测未转染细胞和混合克隆细胞中HIF-1α蛋白的表达情况.结果:经测序验证,成功构建了靶向HIF-1α的重组质粒pCAG-T7-HIF-1α-gRNA,经Western blot验证,转染该重组质粒后人肝癌细胞株HepG2和SK-Hep-1经CoCl2诱导HIF-1α蛋白表达明显减弱.结论:成功构建了靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阚全程	郑州大学第一附属医院药学部	129	657	13.0	21.0
2	李娟	郑州大学第一附属医院感染科	102	348	9.0	13.0
3	余祖江	郑州大学第一附属医院感染科	170	476	10.0	13.0
4	申珅	郑州大学第一附属医院感染科	6	9	2.0	3.0
5	何玉婷	郑州大学第一附属医院感染科	13	19	2.0	4.0
6	孙冉冉	郑州大学第一附属医院感染科	5	7	2.0	2.0
7	陈晓龙	郑州大学第一附属医院感染科	5	8	2.0	2.0