人N端脑钠肽前体(NT-ProBNP)单抗制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘诗琴 向军俭 谈思怡 邵晨晨 黄建芳
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP) 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 441-445
• 页数: 5页
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20160086

摘要

目的 获得人脑钠肽前体N端(NT-proBNP)的高亲和力、高特异性的抗体,建立双抗体夹心ELISA法检测人血浆中NT-proBNP.方法 通过Discovery Studio4.0软件预测抗原表位,合成其表位肽偶联载体蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术获得分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,制备腹水型单抗.通过SDS-PAGE、ELISA等方法对获得的抗体性质进行鉴定,建立了双抗体夹心ELISA检测方法,并对120例临床血液样本中NT-proBNP进行快速检测.结果 获得6株能稳定分泌抗人NT-ProBNP抗体的杂交瘤细胞株,其中4株单抗的腹水型效价高于1×10-6.共筛选出4对能双抗夹心ELISA配对的抗体,其中Ab1与Ab5具有较高的灵敏度和较大的线性范围,其亲和力分别为1.0×1010L/mol与5.9× 109 L/mol,检测线性范围:300～9 600 pg/ml.样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为97.5％(78/80),阴性检出率为100％(40/40).结论 筛选获得1对高亲和力、高特异性的配对抗体,建立了双抗体夹心ELISA的检测方法,亦为新的快速免疫学检测方法的建立奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向军俭		121	1163	18.0	26.0
2	黄建芳		16	54	5.0	7.0
3	刘诗琴		2	0	0.0	0.0
4	谈思怡		2	0	0.0	0.0
5	邵晨晨		2	0	0.0	0.0