小鼠GP73蛋白真核表达质粒的构建及其对mTOR转录水平的影响

• 作者: 何湘 吴飞翔 周鹏宇 曹叶 朱永杰 钟辉 陈健康 魏从文
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠高尔基蛋白73 重组质粒 mTOR 肿瘤转移
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 820-823
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2459字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.06.016

摘要

目的:构建小鼠高尔基蛋白73(mGP73)的真核表达质粒,转染HEK293T细胞株验证重组质粒活性,并检测mGP73过表达情况下对小鼠肝癌细胞中mTOR mRNA水平的影响.方法:以实验室保存的H22小鼠肝癌细胞cDNA文库为模板,采用PCR技术扩增获得mGP73序列,将其插入pcDNA3.1-Flag-vector载体构建成重组质粒,转染HEK293T细胞后用蛋白免疫印迹检测融合蛋白的表达,并用qPCR检测在GP73过表达情况下H22细胞中mTOR转录水平的变化.结果:菌液PCR、重组质粒的双酶切结果及测序均表明重组质粒构建成功,蛋白免疫印迹表明mGP73蛋白在HEK293T细胞中获得表达,qPCR结果表明在mGP73过表达时mTOR的转录水平随之上升.结论:构建了pcDNA3.1-Flag-mGP73真核表达质粒,mGP73 mRNA过表达时mTOR的mRNA水平也上升,这为进一步研究mGP73在小鼠肝脏肿瘤转移过程中的作用奠定了基础.