中华蜜蜂SRP9基因的克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 吴杰 吴鹏杰 姚军 徐书法 徐进 李雨时 武江利 郭岳琴 金红岩
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 中华蜜蜂 SRP9 基因克隆 序列分析 结构预测 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 1332-1339
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2016.12.006

摘要

[目的]探究中华蜜蜂Apis cerana cerana信号识别颗粒9(signal recognition particle 9,SRP9)基因的序列,获得纯化的重组蛋白,为探究其蛋白功能奠定基础.[方法]利用RT-PCR方法,以中华蜜蜂的cDNA为模板扩增中华蜜蜂SRP9基因编码区,并通过软件MEGA5.1构建系统发育树,运用PrediceProtein和SWISS-MODEL等软件预测分析蛋白结构;用大肠杆菌Escherichia coli表达系统进行原核表达;采用尿素洗脱法进行重组蛋白纯化.[结果]扩增得到的中华蜜蜂SRP9基因编码区长为237 bp,命名为AccSRP9.该基因编码78个氨基酸,编码蛋白的相对分子量为9.36 kD,等电点为9.17.系统进化树分析表明,AccSRP9与西方蜜蜂Apis mellifera的SRP9和小蜜蜂Apis florea的SRP9聚成一支.蛋白质二级结构预测发现其含有2个α-螺旋区和3个β-折叠区.利用同源建模获得蛋白质的三维结构.将AccSRP9连入表达载体pGEX-6P-1并在BL21(DE3)中进行原核表达,发现该重组蛋白表达在包涵体中,经蛋白纯化,最终获得了N端带GST标签的重组蛋白pGEX-6P-1-SRP9.[结论]本研究成功克隆了中华蜜蜂SRP9基因AccSRP9,对其序列进行了分析,并获得了带有标签的重组蛋白,为进一步研究该基因的功能提供参考和材料.