人溶菌酶重组酵母工程菌的构建和活性干粉的制备

• 作者: 张炜 陈熙 齐小雨
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 人溶菌酶 毕赤酵母 胞内表达 培养条件 活性酵母干粉
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 1122-1127
• 页数: 6页
• 分类号: S816.4
• 字数: 5252字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2016.05.027

摘要

本试验旨在构建一种胞内表达人溶菌酶的新型酵母工程菌，并利用其高蛋白、富含溶菌酶的特点开发新型动物饲料添加剂，避免直接使用人溶菌酶制剂带来的高成本、活性不稳定等问题。将来自胎盘的人溶菌酶hLYZ基因克隆至表达载体pPICZA上，验证后的重组载体电转化至X?33毕赤酵母中，经标准培养基BMGY／BMMY培养、甲醇诱导表达后，检测蛋白表达活力和人溶菌酶活力。在此基础上，以麦芽汁?蚕蛹为培养基，通过单因素试验和正交试验来优化培养基成分和摇瓶发酵条件。结果表明，人溶菌酶基因在重组酵母工程菌中成功表达且酶活力为1920 U。以麦芽汁和蚕蛹浸提物为碳氮源，测得蚕蛹浸提物占40％并且营养盐含量为170μg／ml时最适合菌体生长。正交试验测得R值的大小为：生长阶段pH值＞诱导阶段甲醇含量＞接种量，最佳摇瓶发酵条件是生长阶段pH值为6，诱导阶段甲醇添加量为1％，接种量为3％。经发酵培养的新型酵母工程菌利用真空冷冻干燥技术制成干粉，活菌数为1 ml 1×109个，溶菌酶活性为1320 U。上述研究结果为新型饲料添加剂的开发和利用奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张炜	南京农业大学生命科学学院	47	261	9.0	14.0
2	陈熙	南京农业大学生命科学学院	6	69	3.0	6.0
3	齐小雨	南京农业大学生命科学学院	2	9	2.0	2.0