基于CRISPR/Cas9技术的水稻千粒重基因tgw6突变体的创建

• 作者: 刘维 王加峰 王慧 罗文龙 郑才敏 郭涛 陈志强
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 水稻 基因编辑 CRISPR/Cas9 TGW6 千粒重
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种?种质资源?分子遗传学
• 页码范围: 1160-1167
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2016.01160

摘要

利用CRISPR/Cas9技术对调控水稻产量千粒重基因TGW6定点编辑，获得了一套有重要育种价值的tgw6突变体。设计了分别由U3、U6a和U6b启动子驱动、长20 bp的guide RNA (gRNA)靶点以靶向编辑TGW6基因的外显子，首先将这3个靶点一起组装到 pYLCRISPR/Cas9-MT(I)载体上，然后利用农杆菌介导侵染水稻材料 H447(R819/玉针香//R819的BC3F6)；提取T0代转基因植株的基因组DNA并对编辑位点附近的DNA片段进行PCR检测及测序分析。结果表明， T0代材料中tgw6的突变频率高达90%，其中纯合缺失突变率约占51%。对T1代纯合缺失突变体的千粒重性状的调查分析结果表明，部分tgw6的缺失突变能显著提高千粒重(大于5%)。不同类型tgw6突变体的成功创建不仅丰富了tgw6的变异类型，为水稻的高产稳产奠定了重要的材料基础，还证实了CRISPR/Cas9技术在水稻基因工程育种中高效、易操作的特点。