兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR鉴定

• 作者: 仇汝龙 宋艳华 左园园 徐为中 李明勇 王芳 胡波 范志宇 薛家宾 陈萌萌 魏后军
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒经典毒株( RHDV) 兔出血症病毒变异毒株( RHDV2) RT-PCR鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 1117-1121
• 页数: 5页
• 分类号: S858.2912.65
• 字数: 3451字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2016.05.026

摘要

本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株（RHDV）和变异毒株（RHDV2）的RT?PCR检测方法。根据GenBank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列，设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物，以人工合成RHDV2的VP60基因构建的pMD19?T?VP60?2和pMD19?T?VP60为模板，进行RT?PCR体系退火温度的优化，优化后的退火温度为58?2℃。对优化后的RT?PCR体系进行RHDV和RHDV2的敏感性试验、特异性试验，并用于检测RHDV人工感染样品和疑似临床样品，结果显示，该方法具有良好的特异性和敏感性，经典RHDV和RHDV2的检测限度分别为95拷贝和76拷贝的靶基因片段，且对支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌等病原以及重组质粒pMD19?T?EBHSV的检测结果均为阴性。 RHDV人工感染的组织样品检出率为100％，15份临床样品中3份为经典RHDV阳性，其他均为经典RHDV及RHDV2阴性。该方法的建立能够实现快速、特异及敏感地检测RHDV和RHDV2，为监测RHDV变异株的流行情况提供技术支撑。