一种新型草鱼呼肠孤病毒人工感染方法

• 作者: 何利波 廖兰杰 朱作言 李勇明 汪亚平 汪浩 褚鹏飞 陈庚 黄容
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 草鱼呼肠孤病毒 人工感染 水产养殖 RT-PCR 分型
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 页码范围: 1166-1171
• 页数: 6页
• 分类号: Q-31
• 字数: 4516字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2016.151

摘要

研究从患病草鱼中新分离到一株草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV),对其进行了病毒纯化与电镜观察、基因组RT-PCR分型以及病毒量定量分析等,并在此基础上探索了一种新的病毒人工感染方法。取病鱼肌肉组织进行病毒纯化与电镜观察,观察到大量病毒粒子,直径在70—80 nm。病毒基因组RT-PCR扩增结果表明,该草鱼呼肠孤病毒新分离株属基因型Ⅱ型GCRV；通过绝对定量的方法,对病毒悬液的浓度进行了测定,为2.97×103 copy/μL。通过灌胃法,对3个组别的实验鱼分别感染不同浓度的病毒液,同时设置灌胃PBS的组别作为对照组。结果显示,3个实验组死亡率均在80%左右,而对照组仅出现一例死亡个体。实验组死亡个体体表发黑,腹部、鳍条基部以及鳃盖处均有明显的出血症状,为草鱼出血病的典型症状。随机选取死亡的个体进行RT-PCR检测,均能检测出Ⅱ型GCRV的条带。以上结果说明,灌胃法可以作为一种新的方法,用于草鱼的GCRV人工感染实验。