粗糙脉孢菌蛋白表达系统构建研究

• 作者: 刘倩 刘浩 孙志勇 孙文良 田朝光 高染染
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 丝状真菌 粗糙脉孢菌 蛋白表达系统 纤维二糖 强启动子
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 160-169
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.07.024

摘要

旨在将模式丝状真菌粗糙脉孢菌（Neurospora crassa）构建为蛋白质表达系统。通过真菌杂交技术构建出粗糙脉孢菌六突变缺失菌株 LQ-1（Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3）作为蛋白表达宿主菌株。该宿主菌株可以用纤维二糖作为诱导物诱导纤维素酶启动子表达，同时又消除了葡萄糖苷酶蛋白的背景条带，有利于目标蛋白表达纯化。构建了分别含有粗糙脉孢菌自身强启动子（Pcbh-1、Pcbh-2和 Ptef-1）的3个新的高效表达载体，该载体带有融合标签蛋白 tev-6×his-gfp，能高效方便的筛选阳性转化子，有利于后续目标蛋白纯化。以纤维素酶 GH3-4和 CBH-1为例，通过重组表达菌株纤维二糖诱导发酵液进行酶活测定、SDS-PAGE 电泳分析和 Western blotting 检测显示，重组蛋白 GH3-4-GFP 和 CBH-1-GFP 成功进行了表达和分泌，分泌水平分别为2.77和2.83 mg/L。Pcbh-1启动子重组蛋白表达水平最高，说明在纤维二糖诱导体系中启动子 Pcbh-1的启动效率最高，初步建立了粗糙脉孢菌纤维二糖诱导的蛋白质表达体系。