分子信标-TaqMan 探针法实时荧光定量 PCR 新型探针及引物

• 作者: 姜文灿 岳素文 江洪 王成彬 葛素君
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 实时荧光定量 PCR TaqMan 探针 反义碱基 引物二聚体 内标系统
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 107-114
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.029

摘要

在 TaqMan 探针法实时荧光定量 PCR 中，排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体（Primer Dimer，PD）引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验；然后通过双重 PCR 的干扰实验选择合适的内标基因，并使用内标质粒检测验证中部同序引物排除 PD 干扰的实用性；最后比较探针法不同体系检测 HBV 基因的灵敏度。结果表明，引物与探针聚合实验中，含有反义碱基的 HBVP4在重复实验中未出现假阳性；竞争性双重 PCR 和非竞争性双重 PCR 两模板开始出现干扰作用的浓度差分别为20倍和100倍；对于内标基因，使用中部同序引物对以及普通引物对分别可以检测到10-9和10-8稀释度；3种 HBV 基因检测体系，使用普通引物对可以检测到 Ct33左右，加入内标系统和使用中部同序引物对均可检测到 Ct35左右。在TaqMan-分子信标结构调整的基础上引入反义碱基可以在排除由引物和探针聚合延伸引起的假阳性问题；在探针法中，使用中部同序引物对和加入内标系统均可降低 PD 的干扰程度，提升检测的灵敏度。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王成彬	中国人民解放军总医院临检科	31	117	7.0	9.0
3	岳素文		4	19	3.0	4.0
4	江洪		5	20	3.0	4.0
7	姜文灿	中国人民解放军总医院临检科	2	8	1.0	2.0
11	葛素君	中国人民解放军总医院临检科	1	7	1.0	1.0