肠出血性大肠杆菌O157∶H7前噬菌体CP-933Y缺失突变株的构建

• 作者: 刘雄 张传朋 李涛 王慧
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌 前噬菌体 CP-933Y Red重组系统
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 804-807
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3095字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.06.012

摘要

目的:利用Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7前噬菌体片段CP-933Y,进而构建CP-933Y缺失突变株.方法:以肠出血性大肠杆菌O157∶H7菌株为模板,加入酶切位点PCR扩增前噬菌体CP-933Y上、下游各600 bp的同源臂序列;酶切后分别连接到pUC19-kan质粒的卡那霉素(包含FRT位点)抗性基因两侧,构建中间是卡那霉素抗性基因标记含有目的基因上、下游同源序列的线性片段;导入含有pKD46质粒的O157∶ H7菌株中,利用Red编码的同源重组酶使该片段与目的基因上、下游发生同源重组,卡那霉素抗性基因置换菌株中CP-933Y前噬菌体片段,最后导入pCP20质粒去除卡那霉素抗性标记基因.结果:经PCR及测序验证,O157∶H7菌株中前噬菌体片段CP-933Y被敲除,敲除株与野生株具有相似的生长曲线.结论:构建了大肠杆菌O157∶H7前噬菌体CP-933Y缺失株,为进一步研究前噬菌体CP-933Y的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王慧		48	107	5.0	8.0
3	李涛	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	16	28	4.0	5.0
4	张传朋		1	0	0.0	0.0
8	刘雄	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	1	0	0.0	0.0