33株抗心肌肌钙蛋白T(cTnT)的单克隆抗体制备、鉴定及应用

• 作者: 周国梁 宋浏伟 杨映晖 胡月红 葛胜祥 陈宇翔 陈自敏 魏淑英
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 心肌肌钙蛋白T (cTnT) 急性心肌梗死(AMI) 单克隆抗体 化学发光
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 1694-1703
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.160125

摘要

旨在制备抗心肌肌钙蛋白T (cTnT)的单克隆抗体(mAb),对单抗进行初步评价鉴定,并建立(cTnT)的化学发光定量检测试剂.首先利用外购的cTnT抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规mAb制备技术和间接ELISA法筛选mAb,以表达和合成的cTnT片段对筛选到的mAb进行表位鉴定.使用双抗体夹心ELISA方法筛选检测cTnT抗原的配对mAb,并建立cTnT全自动化学发光定量检测试剂.使用220例临床标本评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性,另外使用238例临床样本和784例体检人群样本评价该试剂的临床应用.我们成功筛选到33株稳定分泌抗cTnT抗体的杂交瘤细胞株,并对单抗的表位进行初步鉴定.我们筛选到能检测10 pg/mLcTnT抗原的配对mAb E16H8和C8Gll,并使用该配对研制出全自动化学发光定量试剂.该试剂与罗氏试剂相关系数r达到0.959 9,检测一致率95％,利用该试剂盒检测临床样本灵敏度为97.5％,特异性为99.15％,99％体检人群的cTnT浓度分布小于0.080 6 ng/mL,符合WHO对急性心肌梗死的定义标准.综上,初步建立了cTnT诊断优势表位单抗,并利用这些优势表位的单抗建立全自动管式化学发光定量检测试剂,与罗氏试剂检测结果符合率高.