犬BMSCs干细胞的分离培养及成骨诱导分化

• 作者: 何成军 张通明 李伟 赵晓娥 马保华 魏强
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 犬 骨髓间充质干细胞(BMSCs) 体外培养 成骨诱导分化 细胞鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 68-75
• 分类号: Q254|Q813.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.01.009

摘要

为了体外分离犬(Canis lupus)骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymai stem cells,BMSCs),并对其进行成骨诱导分化及鉴定,本研究用全骨髓贴壁法分离培养犬BMSCs,待细胞克隆成片后传代.在传代过程中,取不同代数的细胞进行生长曲线测定;取传至第2代(p2)细胞,对诱导前的细胞和成骨诱导分化10和21d的细胞采用qRT-PCR鉴定性别决定基因相关转录因子2(SRY-related high-monility-group (HMG)-box protein-2, SOX2)、干细胞特异基因POU5f1转录因子4(octamer-binding transcription factor-4,OCT4)和NANOG 3个多能性干细胞标志基因及成骨细胞特异基因骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和骨粘连蛋白(osteonectin,ONN)基因的表达;成骨诱导分化的细胞进行成骨细胞特异性指标碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatase,ALP)、茜素红染色鉴定.结果表明,p5和p10细胞的生长曲线基本保持一致,而p20细胞的生长速度明显低于p5和p10.犬BMSCs表达OCT4和SOX2,但不表达NANOG;成骨细胞诱导10d仍低水平表达OCT4和SOX2,但成骨细胞诱导21d,不再表达OCT4和SOX2.随着诱导时间的延长,成骨细胞特异OCN和ONN基因的表达量增加.进行成骨诱导7d后,ALP活性明显上升;成骨诱导l0d,未形成钙化结节;成骨诱导21d,形成钙化结节,钙化结节被茜素红染成红色,随着诱导时间的延长,形成的钙化结节明显增多.证明犬BMSCs被成功地诱导为成熟的成骨细胞,可作为种子细胞用于兽医临床上犬的重症骨折、骨营养不良性关节病等疾病的治疗提供基础资料,为宠物犬临床疑难疾病的治疗开辟一条新途径.