shRNA靶向沉默Eag1钾通道对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响

• 作者: 吴进 吴采荣 戴立林 曾文容 熊远飞 陈志达
• 来源期刊: 临床肿瘤学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Eag1钾通道 骨肉瘤 细胞增殖 细胞周期 细胞周期蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 874-878
• 页数: 5页
• 分类号: R738.1
• 字数: 3961字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默Etherà go-go 1(Eag1)钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响.方法 使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63细胞(抑制组),同时设转染无义序列(Ad5-Control-shRNA)的空转染组及不进行任何处理的对照组.采用逆转录聚合酶链式反应和Western blotting检测Ad5-Eag1-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后的Eag1 mRNA和蛋白水平,分别采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组的细胞增殖情况,流式细胞仪和Western blotting分别检测各组的细胞周期变化和细胞周期蛋白(cyclin D1和cyclin E)的蛋白水平.建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型并测量各组裸鼠肿瘤体积的变化情况.结果 抑制组的Eag1 mRNA和蛋白水平均低于空转染组和对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);与其余两组相比,抑制组的细胞增殖、克隆形成数、S期细胞比例及细胞周期蛋白水平均降低,而G0/G1期细胞比例升高,以上差异均有统计学意义(P＜0.05).抑制组裸鼠的瘤体积小于空转染组和对照组(P＜0.05).结论 通过shRNA抑制Eag1基因表达可抑制MG-63细胞的增殖并诱导G0/G1期阻滞,可能与调控cyclin D1/E通路有关,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点.