云生毛茛 ISSR-PCR 体系优化与引物筛选

• 作者: 李毅 王建科 王莉 王钧 石琳 胡延萍 许小宁
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 云生毛茛 ISSR-PCR 正交实验设计 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 65-71
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.09.010

摘要

旨在建立稳定可靠的云生毛茛 ISSR-PCR 反应体系。采用正交试验设计方法，对影响云生毛茛 ISSR-PCR 扩增结果的 Mg2+、dNTP、Taq DNA 聚合酶、引物、模板 DNA 五个因素进行优化筛选，对反应程序进行优化，建立适用于云生毛茛的最佳反应体系和扩增程序，并对反应体系和扩增程序进行验证；在此基础上筛选多态性好的 ISSR 引物，采用梯度法筛选各个引物的最适退火温度。结果表明，云生毛茛20μL ISSR-PCR 的最佳反应体系为：模板 DNA 30 ng，Mg2+1.95 mmol/L，Taq DNA 聚合酶0.04 U/μL，dNTP 0.150 mmol/L，引物0.5μmol/L ；最佳反应程序为：94℃预变性5 min ；94℃变性20 s，49.6-60.6℃复性1 min，72℃延伸100 s，38个循环；72℃下延伸6 min。在优化的反应体系和反应程序条件下，从100条 ISSR 引物中筛选获得16条 ISSR 扩增引物，并确定了引物各自的最适退火温度。经过不同居群云生毛茛的验证，证明优化后体系扩增条带清晰且重复性好，可用于后续云生毛茛遗传多样性的研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李毅	中国科学院西北高原生物研究所	83	854	15.0	27.0
2	胡延萍	中国科学院西北高原生物研究所	18	70	6.0	7.0
3	石琳	中国科学院西北高原生物研究所	5	19	3.0	4.0
7	王建科	中国科学院西北高原生物研究所	3	7	1.0	2.0
11	王钧	中国科学院西北高原生物研究所	10	35	4.0	5.0