苏云金芽胞杆菌Sigma K在大肠杆菌中的表达与纯化

• 作者: 宋福平 张杰 彭琦 杨敏 考桂伟 黄闽忠
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 苏云金芽胞杆菌 Sigma K蛋白 生物活性 转录调控
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 基因克隆及功能研究
• 页码范围: 69-75
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150191

摘要

[目的]在大肠杆菌中表达纯化苏云金芽胞杆菌HD73的转录调控因子SigmaK(σK).[方法]PCR扩增出苏云金芽胞杆菌HD73中sigK基因的ORF (Open reading frame)装载到带有His标签的表达载体pET21b上,转入到表达菌株BL21(DE3)中获得重组菌株BL21(pETsigK),通过SDS-PAGE、镍柱亲和纯化、阴离子交换纯化和凝胶迁移实验(EMSA)等方法对Sigma K蛋白进行提取、纯化和生物活性分析.[结果]正确表达出大小约为27 kD的His-Sigma K蛋白,并获得了纯化的蛋白.EMSA结果表明纯化的His-Sigma K蛋白可以与受其控制的crylAc基因启动子结合.[结论]表达和纯化了His-Sigma K蛋白,His-Sigma K具有与受其控制的启动子结合的功能.