苹果抗 ASPV 病毒 RNAi 载体构建及转化砧木 M26的研究

• 作者: 牛良 田莉莉
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苹果茎痘病毒 CP 基因 RNAi 载体 遗传转化
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 页码范围: 100-105
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|S432.4+1
• 字数: 4184字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2016.04.017

摘要

为获得抗病毒的转基因植物新材料，采用同源重组法构建了抗苹果茎痘病毒的植物表达载体，并对苹果砧木材料 M26进行了遗传转化，成功获得了转基因阳性植株。首先以感病的皇家嘎拉叶片为材料，反转录合成 cDNA第一链，采用 PCR 方法克隆获得了489 bp 的 ASPV 外壳蛋白基因的保守片段，通过 TOPO 克隆技术将该基因片段连接进入载体 pENTR ／SD ／D，构建了入门克隆载体 pEN-ASPV，再通过 LR 反应置换该片段连接进入目标载体 pHells-gate12，构建了 RNAi 植物表达载体 Phe-ASPV，并采用冻融法转入根癌农杆菌菌株 EHA105中，获得了可用于植物遗传转化的工程菌 EH-ASPV。采用农杆菌介导的方法转化苹果砧木 M26叶盘，经抗生素筛选和脱菌培养获得了 Kan 抗性芽，进一步进行生根培养后获得了完整的 Kan 抗性植株，对生根植株提取总 RNA 后 RT-PCR 检测结果显示，RNAi表达载体上携带的外源基因片段（489 bp）已成功转入苹果砧木材料 M26中，并在转基因植株内 RNA 水平上得到表达。获得的转基因新材料，为进一步通过病毒接种进行抗病性评价及抗病毒分子育种奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田莉莉	中国农业科学院郑州果树研究所	28	309	9.0	17.0
2	牛良	中国农业科学院郑州果树研究所	67	328	9.0	16.0