PTEN抑制剂对脂多糖诱导兔角膜基质细胞炎性反应的影响

• 作者: 向阳 李轩 汤欣
• 来源期刊: 中华眼视光学与视觉科学杂志
• 关键词: 角膜基质 炎症 脂多糖类 第10号染色体丢失的张力蛋白同源的磷酸酶基因 兔
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 729-735
• 页数: 7页
• 字数: 6224字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2016.12.006

摘要

目的：探讨第10号染色体丢失的张力蛋白同源的磷酸酶基因（PTEN）抑制剂双过氧化矾（BPV）对细菌脂多糖（LPS）诱导的兔角膜基质细胞炎症因子释放的影响及可能机制。方法实验研究。选取10只健康清洁级成年新西兰大白兔，采用组织块酶消化法获得原代兔角膜基质细胞并常规培养。取第2代细胞随机分为不同浓度梯度的LPS组（0.1、1、10μg/ml）及BPV组（250、500、1000 nmol/L）进行预实验，MTT比色法检测各组细胞存活率以确定合适的LPS及BPV浓度。实验组分为正常对照组、LPS组、LPS+BPV 组，运用实时荧光定量PCR 技术检测以上各组中白细胞介素-6（IL-6）及白细胞介素-8（IL-8）的mRNA表达水平；Western blot法分别检测各实验组PTEN及磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）的蛋白相对表达量。ELISA法检测各实验组上清液中IL-6及IL-8的分泌量。数据分析采用单因素方差分析，独立样本t检验、线性回归分析。结果在预实验的MTT比色法检测中，不同浓度梯度的LPS、BPV均可降低角膜基质细胞存活率，总体差异均有统计学意义（χ2=22.32、17.82，P<0.01），选取1μg/ml、500 nmol/L分别作为LPS、BPV的实验浓度。实时荧光定量PCR检测结果显示，正常对照组、LPS组、LPS+BPV组IL-6、IL-8 mRNA的表达量总体差异均有统计学意义（F=46.65、42.59，P<0.01），两两比较显示LPS组IL-6、IL-8 mRNA的表达量（分别为1.29±0.19、1.11±0.04），明显高于正常对照组（均为1.00±0.00）（P＜0.01），而LPS+BPV 组IL-6、IL-8 mRNA 的表达量（分别为1.17±0.08、0.92±0.15）明显低于 LPS 组（P＜0.01）。 Western blot结果显示相对于正常对照组，LPS+BPV组细胞PTEN蛋白表达水平较低（t=29.39， P＜0.01）。3组p-AKT的蛋白相对表达量总体差异均有统计学意义（F=62.83，P<0.01），两两比较显示LPS+BPV组p-AKT的蛋白表达量（0.82±0.07）明显高于LPS组（0.63±0.05）（P＜0.01）。ELISA法检测结果显示，3组上清液中IL-6、IL-8相对浓度的差异均有统计学意义（F=32.41、27.13，P<0.01），与LPS组相比，正常对照组和LPS+BPV 组的IL-6、IL-8的相对浓度均明显较低，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 PTEN的抑制剂BPV可下调由LPS诱导的兔角膜基质细胞炎症因子IL-6、IL-8基因表达及分泌，抑制角膜基质细胞炎症反应，PI3K/AKT信号传导通路可能在其中发挥重要调节作用。