重组质粒pEGFP-C3-HCVc的构建及在RBE细胞中的表达

• 作者: 周佳佳 周泉波 唐超明 曾兵 曾军 程帝 蔡灿锋 辛海洋
• 来源期刊: 广州医药
• 关键词: HCVc 肝内胆管癌 RBE
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8535.2016.05.003

摘要

目的 构建重组pEGFP-C3-HCVc真核表达载体,并建立稳定表达HCVc基因的肝内胆管癌细胞株RBE-core.方法 采用PCR钓取目的基因HCVc,并克隆入pEGFP-C3的多克隆位点,构建pEGFP-C3-HCVc重组质粒.经过双酶切及测序验证后,采用脂质体将pEGFP-C3-HCVc质粒转染到RBE细胞中,经2周G418(200 μg/mL)筛选后进行单克隆挑选及扩大培养,建立稳定表达HCVc的胆管癌细胞株RBE-core.采用RT-PCR和Western blot验证HCVc在RBE-core中的表达情况.结果 PCR成功钓取HCVc基因,大小约573 bp,并插入pEGFP-C3载体HindⅢ和BamH I多克隆位点;双酶切及测序证实目的基因HCVc正确连接到pEGFP-C3的多克隆位点.RT-PCR和Western blot分别在573 bp处和34 KD左右检测到相应的阳性条带.结论 成功构建重组质粒pEGFP-C3-HCVc,并在胆管癌细胞RBE中获得稳定表达.