幽门螺杆菌 lpp20基因在食品级乳酸菌中的表达及免疫活性鉴定

• 作者: 孙楠 张荣光 彭晓燕 段广才 范清堂 郗园林 陈帅印
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 乳酸菌 lpp20基因 幽门螺杆菌 分泌表达 食品级
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: ? 论著?
• 页码范围: 478-481,482
• 页数: 5页
• 分类号: R183
• 字数: 3475字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2016.04.011

摘要

目的：构建分泌表达幽门螺杆菌 lpp20基因的重组乳酸乳球菌菌株，并鉴定其免疫活性，为研究安全高效的幽门螺杆菌口服疫苗奠定基础。方法：采用 PCR 法从幽门螺杆菌基因组 DNA 中扩增 lpp20基因，将 lpp20先与 T 载体（pMD19－T）连接，进而经双酶切与表达载体 pNZ8149－SPusp45连接，用电穿孔法将重组质粒转入食品级乳酸乳球菌菌株 NZ3900中，并用 Nisin 诱导 Lpp20表达，表达产物通过 Western blot 法鉴定免疫活性。结果：lpp20基因的 PCR 扩增产物大小约为540 bp，重组质粒的酶切、PCR 和测序鉴定结果符合预期；在菌体和培养基中均检出表达的 Lpp20蛋白，重组表达的 Lpp20蛋白相对分子质量约为20000，且具有与小鼠抗幽门螺杆菌血清反应的免疫活性。结论：成功构建了能够分泌表达幽门螺杆菌 Lpp20抗原的乳酸乳球菌菌株，该重组菌株在口服疫苗研究中具有应用潜力。