DSPAα1缺失突变体在毕赤酵母中的表达及活性研究

• 作者: 刘堰 华子春 宋小双 牛纯青 苏畅 陈韵
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: DSPAα1 SOE-PCR 缺失突变体 毕赤酵母 纤维平板法
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 246-252
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.09.033

摘要

吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂（Desmodus salivary plasminogen activators，DSPAs）共有4种：DSPAα1、α2、β及γ。其中， DSPAα含有指形区（F）、表皮生长因子区（E）、kringle 区（K）和丝氨酸蛋白酶区（P），DSPAβ含 E、K、P 区，DSPAγ含 K 和 P 区。以 DSPAα1为基础，研究其结构对纤溶活性的影响。采用重叠延伸 PCR 技术（splicing overlap extension PCR，SOE-PCR）获得缺失E 区的 DSPAα1突变体（mDSPAα1），分别构建 mDSPAα1/pPIC9K、DSPAβ/pPIC9K 和 DSPAγ/pPIC9K 重组质粒并转化到巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）菌株 GS115中表达，纤维平板法测活。结果显示未检测到 DSPAγ的表达，DSPAα1活性为2.64×105 U/mg， DSPAβ的活性为1.32×104 U/mg，mDSPAα1活性为151.52 U/mg ；同时使用 DSPAα1、mDSPAα1、DSPAβ时，总活性几乎不受影响，单独使用任意两者时，发现活性均降低2-3倍。mDSPAα1纤溶活性几乎没有，同时 DSPAβ与野生型 DSPAα1相比保留了相当的催化活性。DSPAα1的 N 端区域可以影响其溶栓活性，而缺失 E 区后几乎丧失活性，说明 E 区在 DSPAα1溶栓过程中起着至关重要的作用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	华子春	南京大学医药生物技术国家重点实验室	125	473	11.0	17.0
2	陈韵	重庆西南大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
3	牛纯青	重庆西南大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
4	宋小双	重庆西南大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
5	苏畅	重庆西南大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
6	刘堰	重庆西南大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0