基于PRLR-JAK-STAT5信号传导通路测定鹅催乳素的新方法

• 作者: 宋金委 施振旦 李辉 王振勇 陈哲
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅催乳素受体 信号转导 STAT5 荧光素酶报告基因 催乳素活性
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1389-1395
• 页数: 7页
• 分类号: S835.2
• 字数: 5014字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.07.011

摘要

旨在建立鹅催乳素(Goose prolactin,gPRL)的高灵敏度的测定方法.本研究设计出基于PRLR-JAK-STAT5信号通路的荧光素酶报告基因系统.首先克隆鹅PRLR基因CDS区序列,合成信号转导和转录激活因子5 (Signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)信号应答序列,并分别插入真核表达载体pCMV6-Entry和荧光素酶报告载体pGL3-Enhancer中,构建成为信号接收载体和信号应答载体.然后将两载体同筛选基因载体pEZX-MR03及内参载体pRL-TK共转染到HEK293T细胞中,经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染的转基因细胞株.分别用终浓度为0、30、60、90 ng·mL-1的PRL刺激转基因细胞,通过qRT-PCR和双荧光素酶检测系统测定在不同PRL浓度下转基因细胞株中荧光素酶(Luciferase,Luc)基因的相对表达量和相对活性的变化.筛选出10株成功整合有全部4个转基因载体的转基因细胞株,经过不同浓度PRL刺激后,筛选出一株细胞,其荧光素酶基因表达量和酶活性均表现出随PRL浓度升高而上调的趋势.结果表明,建立的基于PRLR-JAK-STAT5信号传导系统检测鹅PRL生物活性的新方法是可行的,为准确测定家禽PRL奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王振勇	山东农业大学动物科技学院	76	367	11.0	16.0
2	陈哲	江苏省农业科学院畜牧研究所	22	74	6.0	7.0
3	施振旦	江苏省农业科学院畜牧研究所	72	277	9.0	11.0
4	李辉	江苏省农业科学院畜牧研究所	15	41	3.0	5.0
5	宋金委	山东农业大学动物科技学院	1	2	1.0	1.0