番茄褪绿病毒 CP 基因克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 张剑峰 迟胜起 韩磊
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 番茄褪绿病毒 外壳蛋白基因 原核表达 基因克隆
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 页码范围: 57-62
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|S641.03
• 字数: 3866字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2016.04.010

摘要

为制备番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus，ToCV）抗血清，以番茄病叶为试验材料，提取总 RNA，根据ToCV CP 基因设计特异性引物，利用 RT-PCR 方法克隆目的基因，构建原核表达载体 pET32a-ToCVCP，在大肠杆菌Rosetta （DE3）菌株中表达 CP 蛋白。结果表明：ToCV CP 基因（GenBank 登录号：KT809400）全长774 bp，编码257个氨基酸，与 GenBank 中其他地区分离物核苷酸序列同源性为97．2％～99．6％，推导的氨基酸序列同源性为97．3％～100．0％。核苷酸序列保守位点占全部位点的91．3％，氨基酸序列保守位点占全部位点的88．3％，表明不同地理来源的番茄褪绿病毒的 CP 基因保守性较高。将 ToCV CP 基因克隆到原核表达载体 pET-32a（＋）上，并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。SDS-PAGE 分析表明，转 pET32a-ToCVCP 载体的大肠杆菌 Rosetta （DE3）菌株表达了分子量约33 kDa的重组蛋白。该重组蛋白在37℃，1．0 mmol ／L IPTG、诱导6 h，表达量最大。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张剑峰	青岛农业大学农学与植物保护学院	11	28	3.0	4.0
2	迟胜起	青岛农业大学农学与植物保护学院	24	113	5.0	9.0
3	韩磊	青岛农业大学农学与植物保护学院	3	3	1.0	1.0