摘要:
滋养层(trophoblast,TR)在胚胎植入和胎盘发育中有重要作用,TR细胞分化和谱系形成的分子机制是研究胎盘发育的重要基础.为了比较体外获得的TR细胞与猪(Susscrofa)体内TR细胞是否具有差异,从猪怀孕子宫中取得胎盘组织,并同时分离胎盘组织细胞进行体外培养,利用qRT-PCR检测胎盘组织及其细胞以及猪的体外受精(in vitro fertilization,IVF)囊胚来源TR(IVF-TR)细胞相关基因表达水平,并对其进行比较.免疫荧光染色结果显示,猪IVF-TR细胞具有典型的滋养层细胞特点,呈上皮样形态,表达角蛋白18(keratin 18,KRT18)、角蛋白7(keratin 7,KRT7)和胚胎阶段特异性抗原(stage specific embryonic antigen 1,SSEA1)等滋养层细胞的标志因子.形态观察结果显示,猪的胎盘为弥散的上皮绒毛膜胎盘,胎盘母体一侧有许多凸起与子宫壁贴附,较易剥离获得;由猪胎儿胎盘组织分离的细胞,为细长的梭形和上皮样形态,生长缓慢,最多可传2代.qRT-PCR检测显示,不同来源的TR细胞,基因的表达存在差异,在胎盘组织中的尾型同源盒转录因子2(caudal homeobox transcription factor 2,CDX2)、妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoprotein,PAG)和GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)的表达量要显著高于IVF-TR细胞(P<0.05),而心脏和神经嵴衍生物1(heart and neural crest derivatives expressed 1,HAND1)和钙粘蛋白3(cadherin 3,CDH3)基因要显著低于IVF-TR细胞(P<0.05);从胎盘分离培养的细胞,除TEA域家族成员4(TEA domain family member4,TEAD4)的表达显著高于胎盘组织和IVF-TR(P<0.05),其余基因的表达水平多比这二者低.结果提示,IVF-TR细胞更接近分化早期的TR细胞,基因表达不同于其胎盘组织中处于分化晚期的成熟TR细胞,而体外分离的胎盘组织细胞与体内组织之间也存在基因表达的差异.结果说明IVF-TR细胞可能作为研究猪TR分化的材料,为猪胎盘发育和分化的研究提供一个可用的工具.本研究为初步评估猪IVF-TR细胞能否用于猪胎盘TR发育和分化研究提供了参考资料.