弓形虫ROP18重组腺病毒载体的构建及其对神经干细胞C17.2凋亡的影响

• 作者: 余莉 张贤 沈继龙 甘小凤 程正阳 罗庆礼 都建
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 棒状体蛋白18 神经干细胞C17.2 重组腺病毒 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 234-239
• 页数: 6页
• 分类号: R382.5
• 字数: 4665字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.03.005

摘要

目的 构建弓形虫棒状体蛋白ROP18重组腺病毒载体,研究其对神经干细胞C17.2凋亡的影响.方法 将弓形虫ROP18从PEGFP-G2-ROP18重组质粒上亚克隆至腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP,重组腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP-ROP18经PCR、测序鉴定正确后,与骨架质粒pHBAd-BHG共转染HEK293细胞进行包装,收获、扩增重组腺病毒并对其滴度进行测定.以MOI=70的重组腺病毒感染神经干细胞C17.2,转染不同时间荧光显微镜观察基因的表达情况.转染48 h用CCK-8法检测C17.2的增殖情况;转染24 h采用Annexin V-APC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot法检测半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白水平.结果 重组ROP18过表达腺病毒在C17.2神经干细胞内能有效表达.转染48 h,与空载体对照组相比,C17.2细胞增殖活性明显降低(P＜0.05);转染24 h,流式细胞术检测结果显示,ROP18基因转染组C17.2细胞凋亡率明显增加(P＜0.001);Western blot检测显示caspase-3活性片段的表达明显增加(P＜0.05).结论 成功构建了弓形虫ROP18重组腺病毒并在神经干细胞C17.2中表达,ROP18重组腺病毒能诱导C17.2神经干细胞凋亡.