线粒体转录复合物各因子质粒标准品的构建

• 作者: 冯俊 罗德艳
• 来源期刊: 川北医学院学报
• 关键词: 线粒体转录因子 A 线粒体转录因子B1 线粒体转录B2 线粒体RNA聚合酶 质粒标准品 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 392-395
• 页数: 4页
• 分类号: R332
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-3697.2016.03.030

摘要

目的：构建大鼠线粒体转录因子 TFAM（A）、线粒体转录因子 TFB1M （B1）、线粒体转录 TFB2M （B2）及线粒体RNA 聚合酶（POLRMT）的质粒标准品，为检测内耳细胞线粒体 TFAM、TFB1 M、TFB2M、POLRMT 的 mRNA 表达水平做基础。方法：设计特异性引物和探针，提取大鼠内耳组织总 mRNA 逆转录成 cDNA，PCR 扩增、纯化目的片段，将纯化产物与 pZer-oBack ／blunt 载体重组，提取重组质粒，经测序鉴定后，用实时荧光绝对定量 PCR 建立标准曲线。结果：测序结果与各目的序列一致，获得良好的标准曲线（R2＞0．99）。结论：成功构建了各目的基因的质粒标准品。