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miR-155靶向调控SP1、E2F2 mRNA转录水平的功能验证
miR-155靶向调控SP1、E2F2 mRNA转录水平的功能验证
作者:
刘真
尹斌
管静芝
舒彬
袁龙
赵盼
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
特异性蛋白1
E2F2转录因子
微小RNA155
荧光素酶报告基因
人端粒酶逆转录酶
质粒
摘要:
目的:观察微小RNA155(miR-155)对端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关蛋白特异性蛋白1(SP1)及转录因子E2F2重组质粒表达的影响,为进一步研究miR-155调控肿瘤细胞hTERT表达的机制提供实验基础。方法采用生物信息学预测软件TargetScan和Miranda预测SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR是否是人miR-155的作用靶点。针对SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR设计互补的两条寡核苷酸,包括目标序列(即SP1、E2F2野生型序列)及突变序列(SP1-mu、E2F2-mu),构建SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR报告基因载体pMIR-SP1、pMIR-E2F2、pMIR-SP1-mu和pMIR-E2F2-mu。培养HEK-293细胞,采用脂质体法将SP1和E2F2的野生型和突变型pMIR-Luc质粒共转染HEK-293细胞24 h。将细胞分为SP1空白对照组、SP1目标序列组、SP1突变序列组、E2F2空白对照组、E2F2目标序列组、E2F2突变序列组,均加入0.2μg重组质粒、0.01μg对照质粒和0.375μL寡核苷酸,培养24 h。采用双荧光素酶报告基因系统检测双荧光素酶活性,以萤火虫荧光素酶活性值(F)/海肾荧光素酶活性值(R)比值评价miR-155与SP1及E2F2 mRNA 3′-UTR结合效果。结果在线预测结果示,SP1 mRNA 3′-UTR和E2F2 mRNA 3′-UTR均有与miR-155完全互补配对的序列,确定二者均为miR-155的靶基因。经鉴定,SP1和E2F2报告基因重组质粒构建成功。SP1目标序列组F/R低于SP1空白对照组及SP1突变序列组(P均<0.05),E2F2目标序列组F/R低于E2F2空白对照组及E2F2突变序列组(P均<0.05)。结论成功构建了SP1和E2F2报告基因重组质粒,证实miR-155能够靶向结合SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR,在转录后水平抑制SP1和E2F2的表达。
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miR-155靶向调控SP1、E2F2 mRNA转录水平的功能验证
来源期刊
山东医药
学科
医学
关键词
特异性蛋白1
E2F2转录因子
微小RNA155
荧光素酶报告基因
人端粒酶逆转录酶
质粒
年,卷(期)
2016,(46)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
35-38
页数
4页
分类号
R730.231
字数
4096字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1002-266X.2016.46.009
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姓名
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刘真
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管静芝
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主办单位:
山东卫生报刊社
出版周期:
周刊
ISSN:
1002-266X
CN:
37-1156/R
开本:
大16开
出版地:
济南市燕东新路6号
邮发代号:
24-8
创刊时间:
1957
语种:
chi
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