钙蛋白酶抑制蛋白基因过表达Balb／C小鼠的繁育及鉴定

• 作者: 刘桂剑 李冰玉 李明辉 虞勇 邹云增 陈瑞珍
• 来源期刊: 中国临床医学
• 学科: 医学
• 关键词: 钙蛋白酶 钙蛋白酶抑制蛋白 柯萨奇B3病毒 转基因 基因型鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 524-527
• 页数: 4页
• 分类号: R542.2+1
• 字数: 2858字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12025/j.issn.1008-6358.2016.20160117

摘要

目的：建立钙蛋白酶抑制蛋白（calpastatin ，CAST）基因过表达Balb／C小鼠的培育方法，并探讨碱性裂解液提取基因组DNA在子代鼠基因型鉴定中的价值。方法：将雄性C57BL／6‐CAST＋／－转基因小鼠与雌性Balb／C野生型小鼠杂交，将雄性CAST＋／－杂合子代小鼠与雌性Balb／C野生型子代小鼠杂交，连续杂交至消除C57BL／6小鼠遗传背景。取子代小鼠鼠尾组织，采用碱性裂解液提取基因组 DNA ，PCR法扩增 CAST 基因片段，琼脂糖凝胶电泳鉴定结果。采用柯萨奇B3病毒（CVB3）感染Balb／C‐CAST －／－小鼠以建立急性病毒性心肌炎小鼠模型。结果：C57BL／6‐CAST＋／－转基因小鼠与雌性Balb／C野生型小鼠连续杂交10代可消除C57BL／6小鼠遗传背景。采用碱性裂解液提取的基因组DNA数量、纯度能够满足后续实验需要，且产物大小与目的片段一致。成功建立Balb／C‐CAST －／－基因型小鼠急性病毒性心肌炎模型。结论：成功建立Balb／C‐CAST基因过表达小鼠，为后续研究奠定了基础；碱性裂解液提取基因组DNA简便、高效，值得推广。