真核表达的EF-1α-Flag蛋白对体外蛋白翻译的影响

• 作者: 付洋波 曹诚 李平 胡勇 邱立红 颜芳 高婷
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 延伸因子1α Flag肽置换 蛋白翻译
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 620-624
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 5106字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.05.004

摘要

目的:构建EF-1 α-Flag到pcDNA3.0表达载体上,在哺乳动物细胞中表达并纯化延伸因子1α(EF-1α),测定其对体外蛋白翻译的影响.方法:通过PCR技术从293T细胞cDNA文库中扩增EF-1α基因片段,连接到pcDNA3.0载体上,经电泳、测序和转入细胞中检测EF-1α-Flag蛋白表达等方式验证所构建的重组质粒是否正确,然后经Flag肽置换法纯化出EF-1α蛋白用于体外蛋白翻译实验,萤光素酶活性检测翻译出的蛋白含量.结果:测序和蛋白表达鉴定结果表明扩增的EF-1α-Flag基因序列正确,所构建的重组载体在哺乳动物细胞中能获得表达;考马斯亮蓝染色发现经Flag肽置换的EF-1α蛋白纯度较高,在体外蛋白翻译实验中EF-1α蛋白能促进蛋白的翻译.结论:从哺乳动物细胞中纯化的EF-1α蛋白能促进蛋白翻译,可能与其作为翻译延伸因子相关,为进一步研究EF-1α的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹诚	军事医学科学院生物工程研究所	112	536	10.0	19.0
2	李平	军事医学科学院生物工程研究所	63	162	6.0	9.0
3	邱立红	军事医学科学院生物工程研究所	4	3	1.0	1.0
4	付洋波	军事医学科学院生物工程研究所	4	3	1.0	1.0
5	颜芳	军事医学科学院生物工程研究所	3	2	1.0	1.0
6	高婷	军事医学科学院生物工程研究所	7	10	2.0	3.0
7	胡勇	军事医学科学院生物工程研究所	3	1	1.0	1.0