番木瓜环斑病毒弱毒株的构建及分析

• 作者: 付兰兰 周鹏 庹德财 沈文涛 言普 黎小瑛
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 番木瓜环斑病毒 弱毒株 定点突变 交叉保护
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 2366-2375
• 页数: 10页
• 分类号: Q949.759.6
• 字数: 7526字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2016.12.020

摘要

弱毒株是利用交叉保护防治植物病毒病害的关键限制因子.通过对马铃薯Y病毒属病毒(强、弱毒株)的全长及部分氨基酸序列比对分析,筛选出在亲本强毒株PRSV-LM的P1和HC-Pro基因上的8个可能与致病性相关的氨基酸突变位点(I309、K4811、K598、R728、F753、L754、N787和D944).采用定点突变和Gibson拼接法,分别成功构建了4种含有2个突变位点(L754和N787)、4个突变位点(I309、K481、F753和D944)、6个突变位点(I309、K481、F753、L754、N787和D944)和8个突变位点(I309、K481、K598、R728、F753、L754、N787和D944)的PRSV-LM全长cDNA侵染性克隆突变体:pGprsvm2、pGprsvm4、pGprsvm6和pGprsvm8.经人工接种、病症观察和RT-PCR检测,4种突变体克隆均能系统性侵染非转基因番木瓜植株,除克隆pGprsvm2的病症表现与亲本强毒株PRSV-LM一致外,其他多位点突变的克隆pGprsvm4、pGprsvm6和pGprsvm8在番木瓜植株上的病症严重程度出现依次减弱,而克隆pGprsvm8的病症最弱,且延迟2周发病.本实验初步验证了6个氨基酸突变位点(I309→S、K481→Q、K598→E、F753→L、R728→I和D944→N)与PRSV-LM的病症表现及致病力相关,其中K598→E和R728→I可能是影响致病性的关键位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黎小瑛	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	36	352	8.0	18.0
2	沈文涛	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	66	524	11.0	20.0
3	言普	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	33	132	5.0	9.0
4	庹德财	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	13	24	3.0	4.0
5	付兰兰	海南大学农学院	1	2	1.0	1.0