AFT024-SCF细胞系的构建及其生物学功能鉴定

• 作者: 张祥忠 李陈 杨丹 汪颖 薛淼 陆英
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: AFT024-SCF细胞系 干细胞因子 造血干/祖细胞 HPC-Lhx2细胞系
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 745-751
• 页数: 7页
• 分类号: R551
• 字数: 5346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2016.04.027

摘要

目的:构建AFT024-SCF和HPC-Lhx2细胞系,并用HPC-Lhx2细胞系鉴定AFT024-SCF细胞系的生物学功能.方法:采用逆转录病毒感染法构建干细胞因子(stem cell factor,SCF)依赖的永生化造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,HPC)-Lhx2细胞系和小鼠胎肝基质细胞系AFT024-SCF及其不含目的基因的对照组细胞系AFT024-GFP.采用real-time PCR法及Western blot法鉴定此AFT024-SCF细胞系中SCF的表达.ELISA法鉴定AFT024-SCF上清液中SCF的表达.收集AFT024-SCF及AFT024-GFP细胞培养上清液并以1:10与IMDM基础培养基混合备用.以AFT024-SCF组上清液为实验组,AFT024-GFP组上清液为内源性阴性对照组,无任何添加的IMDM基础培养基为外源性阴性对照组,添加重组SCF的IMDM培养基为阳性对照组,分别与HPC-Lhx2细胞系共培养72 h.MTT法检测各组HPC-Lhx2细胞增殖活性,集落形成实验鉴定HPC-Lhx2细胞系扩增后的细胞干性.结果:构建的AFT024-SCF细胞系表达SCF;HPC-Lhx2细胞系体外培养72 h后,外源性及内源性阴性对照组未能维持HPC-Lhx2细胞增殖;而阳性对照组及实验组均可促进HPC-Lhx2细胞增殖;阳性对照组及实验组细胞均有集落形成单位,且差异无统计学意义,阴性对照组无集落形成单位.结论:成功构建表达SCF的AFT024-SCF细胞系,其培养上清液能够替代重组SCF用于HPC-Lhx2细胞系的体外扩增.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张祥忠	中山大学附属第三医院血液内科	42	237	7.0	14.0
2	杨丹	中山大学附属第三医院血液内科	9	84	4.0	9.0
3	陆英	中山大学附属第三医院血液内科	34	230	8.0	13.0
4	汪颖		3	7	2.0	2.0
5	李陈	中山大学附属第三医院血液内科	1	0	0.0	0.0
6	薛淼	中山大学附属第三医院血液内科	1	0	0.0	0.0