烟粉虱溶菌酶基因的鉴定及表达分析

• 作者: 于洁 王海鸿 王登杰 雷仲仁
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 烟粉虱 溶菌酶 生物信息学分析 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2016,（13）
• 所属期刊栏目: 专题:烟粉虱
• 页码范围: 2534-2543
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.13.009

摘要

[目的]鉴定烟粉虱(Bemisia tabaci)体内的溶菌酶基因,并对其序列特征、进化关系和表达模式进行分析,探索该基因在烟粉虱应对球孢白僵菌侵染过程中的作用,为进一步解析烟粉虱先天免疫过程提供理论依据.[方法]以第2代高通量测序的结果为依据,比对非冗余核苷酸数据库,筛选E值＜10-5的基因为烟粉虱溶菌酶基因(lysozyme gene of Bemisia tabaci,BtLyz),利用ORF Finder预测BtLyz的开放阅读框,并得到氨基酸序列;利用Pfam和SMART预测BtLyz的蛋白质结构域;利用SinglP 4.1 Server预测BtLyz序列的信号肽;利用MEGA6.0软件进行BtLyz的氨基酸多序列比对;利用MEGA6.0软件,对BtLyz与其他昆虫的31个同源蛋白序列进行系统进化分析,并利用邻接法构建系统进化树来进一步分析鉴定该基因;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析球孢白僵菌侵染烟粉虱卵、若虫、成虫后,在1 2、24、36、48、60 h时目标基因的时空表达模式.[结果]鉴定出烟粉虱4个溶菌酶基因,分别命名为BtLyz1、BtLyz2、BtLyz3和BtLyz4,基因序列全长分别为1 819、1 149、829和928 nt,分别编码159、160、148和160个氨基酸,且均含有信号肽.蛋白质结构分析、氨基酸序列比对和系统进化分析发现,BtLyz1和BtLyz4属于i型溶菌酶,BtLyz2和BtLyz3属于c型溶菌酶.BtLyz-1与豌豆长管蚜ApLyz-i1位于同一进化支上,BtLyz4与柑橘木虱DcLyz-i3和豌豆长管蚜ApLyz-i2位于同一进化支上.BtLyz2和BtLyz3与褐飞虱N1Lyz-c1和异色瓢虫HaLyz-c3位于同一进化支上.与对照相比,卵期4个溶菌酶基因和若虫期BtLyz4均相对表达量没有显著变化;若虫期BtLyz1的相对表达量先上调再下调,而后又有所上调的波动趋势,24 h时上调表达最明显,为对照组的4.55倍;成虫期BtLyz1和BtLyz4的相对表达量均为先上调再下调,而后又有所上调的波动趋势,60 h时上调表达最明显,为对照组的11.31和4.21倍;若虫期BtLyz2和BtLyz3的相对表达量均为先上调再下调表达,在诱导24 h时上调表达最明显,为对照组的5.09和8.31倍,而后急剧下调,在60h时下调表达最明显,为对照组的0.19和0.13倍;成虫期BtLyz2和BtLyz3的相对表达量均为先上调再下调的表达趋势,在24 h时上调最明显,为对照组的5.56和8.84倍.[结论]从烟粉虱体内鉴定了4个溶菌酶基因序列,其中2个为c型溶菌酶序列,2个为i型溶菌酶序列;在球孢白僵菌侵染烟粉虱不同虫态、不同时间后,卵期的相对表达量与对照相比没有显著变化;在若虫和成虫期,不同BtLyzs表现出不同的表达趋势.4个BtLyzs可能参与了烟粉虱对真菌侵染的免疫反应,有可能成为烟粉虱生物防治的潜在新靶标.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷仲仁	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	70	979	18.0	27.0
2	王海鸿	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	24	226	8.0	14.0
3	于洁	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	6	21	3.0	4.0