以防御素HD5为效应分子EGFR靶向融合蛋白构建及其抗胰腺癌细胞株活性研究

• 作者: 刘文娟 刘艳丽 宋现让 王兴武 谢丽
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰腺肿瘤 融合蛋白 人表皮生因子受体 力达霉素辅基蛋白 人防御素5
• 年，卷（期）: 2016,（20）
• 所属期刊栏目: 实验研究/论著
• 页码范围: 1344-1350
• 分类号: R735.9
• 语种: 中文

摘要

目的 人α防御素主要由中性粒细胞(HNP1、HNP2和HNP3)和小肠潘氏细胞(HD5和HD6)分泌.HNP1-3可以被作为肿瘤标志物,小剂量的α防御素可以促进肿瘤的增长,大剂量的α防御素可以裂解杀死肿瘤细胞.制备人防御素(human defensin-5,HD5或D5)、力达霉素辅基蛋白(lidamycin apoprotein,LDP)与EGFR配体寡肽(EGFR-di-recting ligand peptide,Ec)组合的融合蛋白Ec-LDP-D5,并初步探讨其抗胰腺癌活性.方法 采用基因工程的方法制备融合蛋白基因,并将其表达纯化得到融合蛋白Ec-LDP-D5.融合蛋白与细胞表面EGFR的亲和活性采用ELISA和细胞免疫荧光化学法;采用CCK-8法测定融合蛋白对人胰腺癌细胞PNAC-1和Aspc-1的体外杀伤活性;流式细胞术检测Ec-LDP-D5蛋白对细胞凋亡的影响.结果 成功构建并表达融合蛋白Ec-LDP-D5,产物主要以包涵体的形式存在,目的蛋白经纯化、复性后,每升发酵液可以获得1 mg纯度达到85％.Ec-LDP-D5可与高表达EGFR的PNAC-1和Aspc-1细胞表面结合.Ec-LDP-D5对PNAC-1和Aspc-1肿瘤细胞有强烈的杀伤作用,Ec-LDP-D5蛋白对Aspc-1肿瘤细胞抑制率为76.8％,与Ec-LDP的抑制率49.4％相比,差异有统计学意义,P=0.038;对PANC-1细胞抑制率为64.6％,与Ec-LDP的抑制率28.3％相比,差异有统计学意义,P=0.042.Ec-LDP-D5在8μmol/L的浓度下即可强烈的诱导细胞发生凋亡,细胞凋亡率(24.6±0.56)％,与Ec-LDP的凋亡率相比P=0.011.结论 本实验制备的防御素融合蛋白Ec-LDP-D5可以与高表达EGFR的PNAC-1和Aspc胰腺癌细胞结合,对胰腺癌细胞具有强烈的杀伤活性和诱导凋亡能力,具有发展为抗肿瘤靶向药物的潜能.