目的:采用高效液相色谱法建立湘葛一号根指纹图谱,并同时测定5种异黄酮的含量。方法色谱条件:采用 AT · LI‐CHROM C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm ,5μm);以甲醇‐水溶液为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0 mL · min-1;检测波长为250 nm ;柱温为30℃。对不同采收期的10批样品的图谱进行测定,运用中国药典委员会的“中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004AB”进行评价,并对5种异黄酮成分进行含量测定。结果建立了湘葛一号根 HPLC指纹图谱,各色谱峰分离度良好,确定了7个共有峰,并采用对照品指认了其中5个色谱峰。含量测定条件通过方法学验证,葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素的线性范围分别为5.00~50.00,1.00~10.00,1.82~18.20,1.00~10.00和2.00~20.00μg · mL-1,线性关系良好(r>0.999),平均加样回收率为98.8%~101.8%,5种异黄酮含量测定结果可初步确定适宜采收期为12月份。结论该方法所建立的湘葛一号根指纹图谱特征性强、方法简单、结果可靠,结合主要有效成分含量测定可更好地用于其质量控制,对其鉴定也具有参考价值。