利用CRISPR技术下调T细胞功能负调节基因PD-1表达的研究

• 作者: 呼万红 邵康 靳燕玲 马小京 魏芳
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: CRISPR技术 PD-1 CD25
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 414-417
• 页数: 4页
• 字数: 2826字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2016.06.003

摘要

目的：探索慢病毒介导的成簇的规律间隔短回文重复序列( CRISPR)技术下调原代T细胞PD-1基因的可行性。方法将多个PD-1靶向序列作为sgRNA序列体外合成后,分别插入带有cas9基因的慢病毒载体 pLentiCRISPR 中,包装慢病毒并感染原代 T 细胞,通过流式细胞术分析CRISPR技术敲除对PD-1表达的影响。结果构建了6个靶向基因PD-1不同位点的pLentiCRISPR载体A1~A6,并且包装病毒。发现原代T细胞的激活状态与PD-1的表达相伴随,以及PD-1高表达细胞群中存在CD25共表达现象。含有靶向基因PD-1的CRISPR病毒分别感染T细胞后,A2和A6对PD-1高表达的细胞群敲除效率最好,分别为19%和29%。结论 CRISPR技术可在原代T细胞中有效敲除PD-1。