解淀粉芽孢杆菌B1619脂肽类抗生素的分离鉴定及其对番茄枯萎病菌的抑制作用

• 作者: 刘永锋 向亚萍 周华飞 陈志谊
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 解淀粉芽孢杆菌B1619 脂肽类抗生素 抑菌活性 番茄枯萎病菌
• 年，卷（期）: 2016,（15）
• 所属期刊栏目: 专题:蔬菜病虫害生物防治
• 页码范围: 2932-2944
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.15.008

摘要

[目的]从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)生防菌株B1619发酵液上清中分离脂肽类抗生素,分析其抑菌活性相关成分,为应用解淀粉芽孢杆菌B1619菌株防控番茄枯萎病提供依据.[方法]利用特异性引物对B1619中3种脂肽类抗生素合成相关基因sfp、ituA和fenB进行检测;通过盐酸沉淀、甲醇抽提法等方法提取脂肽类抗生素粗提物:用SupelcleanTM LC-18柱及PHASE HF-NH2柱对3种脂肽类抗生素粗提物进行分离;通过MALDI-TOF-MS和HPLC分析、鉴定3种脂肽类抗生素;采用平板对峙培养分别测定3种脂肽类抗生素粗提物对番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.lycopersici)的抑菌活性.[结果]从解淀粉芽孢杆菌B1619的基因组DNA中扩增sfp、ituA和fenB等脂肽类抗生素合成基因,扩增产物经克隆、测序分析,表明B1619菌株中含有这3个基因.通过HPLC分析,发现60％甲醇洗脱液分离物分别在12、16.5、18 min处出现相应峰值,保留时间与bacillomycin L标准品一致,分泌量为18.5 mg·L-1;70％甲醇洗脱液分离物分别在22、34、37、51及53 min处出现相应峰值,保留时间与fengycins标准品一致,分泌量为5.1 mg·L-1;100％甲醇洗脱液分离物分别在27、37、41、51及53 min处出现相应峰值,保留时间与surfactins标准品一致,分泌量为74.3 mg·L-1.经液质联用进一步验证分析3种脂肽类抗生素的质子化峰值,60％甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 043.4、1 057.5和1 071.4 Da,是C13-C15的bacillomycin L;70％甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 463.9、l 477.9、1 491.9和1 505.9Da,是C15-C17的fengycins;100％甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 008.6、1 022.7和1 036.7 Da,是C13-C15的surfactins.平板对峙法试验结果表明1 mg·mL-1 bacil lomycin L和fengycins对番茄枯萎病菌有较强的抑菌效果,而1 mg·mL-1surfactins对番茄枯萎病菌的抑菌活性较弱,再将surfactins的浓度提高至3和6 mg·mL-1,发现其抑菌效果没有明显变化.[结论]B1619菌株分泌3种脂肽类抗生素,其中对番茄枯萎病菌生长起重要抑制作用的抗生素是bacillomycin L和fengycins,surfactins对番茄枯萎病菌的抑制活性较弱.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈志谊	江苏省农业科学院植物保护研究所	162	3643	34.0	51.0
5	向亚萍	江苏省农业科学院植物保护研究所	3	73	3.0	3.0
9	周华飞	江苏省农业科学院植物保护研究所	6	90	5.0	6.0
13	刘永锋	南京农业大学植物保护学院	6	66	4.0	6.0